长青藤医学编辑
作者：张科宏
编辑：Freda
2019.10.15
一个试验，临床也好、动物也好，它的结果是否可靠，主要取决于以下两个关键因素：
1、研究对象的随机分配；
2、足够的重复，也就是有足够的样本量。
说样本量多少，有一个前提：样本之间是否相互独立？如果相互独立的10个样本，是10个样本；但不是相互独立的10个样本，再说10个样本就有点勉强了。
今天，我们用2019年7月发表在中华医学杂志英文版的一篇论文深入讨论这个话题。
Early-life stress alters sleep structure and the excitatory-inhibitory balance in the nucleus accumbens in aged mice
生命早期应激在老龄小鼠上改变睡眠结构和伏隔核兴奋抑制平衡
(DOI:10.1097/CM9.0000000000000279 )
论文对研究方法的描述：
Twenty aged male C57BL/6 mice (>16 months, n = 10 per group) were used in this study.
本研究用了20只月龄大于16的雄性C57BL/6小鼠，每组10只。
During post-natal days 2 to 9, dams were provided with either sufficient (control) or a limited nesting and bedding materials (stressed).
“dam”是多义词，在这里的意思是“喂奶的母鼠”；
这句话的含义是：
生产后第二天到第九天，一些老鼠妈妈有足够的做窝材料，另一些老鼠做窝材料短缺。做窝材料短缺了，老鼠妈妈就会不高兴，小老鼠也不舒服，这就是所谓的生命早期应激。有足够做窝材料的老鼠就是健康对照。
When the mice were 16 to 17 months old, their sleep-wake behaviors were recorded over 24 h using electroencephalogram and electromyelogram.
小老鼠变成老老鼠以后，24小时连续脑电图、肌电图监测记录睡眠。
The amount of each sleep-wake stage, mean duration, and stage transition was analyzed.
分析睡眠觉醒周期。
Then, five animals were randomly chosen from each group and were used to measure the expression levels of vesicular glutamate transporter-1 (VGluT1) and vesicular transporters of g-aminobutyric acid (VGAT) in the NAc using immunohistochemistry.
每组随机拿出5只老鼠处死，用免疫组化检测代表性兴奋递质glutamate和抑制递质GABA的转运体，用作兴奋抑制平衡的指标。
结果：
Compared with the control mice,the early-life stressed aged mice spent less time awake over 24 h (697.97 ± 77.47 min vs. 631.33 ± 34.73 min, t17 = 2.376, P = 0.030).
和对照小鼠相比，生命早期应激小鼠醒着的时间更短。按照这些描述，每组有10只老鼠。
那样本量到底是不是10，需要看这10只老鼠之间是什么关系？
我在论文正文里找到了一些细节：
On the morning of P2, the pups were weighed, and the litters were culled to six to eight pups with an equal number of males and females whenever possible.
出生第二天，每窝留6－8只小老鼠，雄性和雌性数量尽量相同。
The stress procedure started on P2 and ended on the morning of P9.
应激从第二天开始持续到第九天结束。
The male offspring were weaned at P28 and group-housed with 3 to 4 animals per cage.
雄性仔鼠28天断奶，每只笼子3只或者4只继续喂养。
Ten animals from each group were randomly selected for the following experiments.
每组里随机选取10只动物进行实验。
每组随机选取10只老鼠是什么概念，这10只老鼠具体是怎么选的？比如说是从几窝里面选出的？
假设研究者总共是有6窝老鼠，3窝作为早期应激试验组，还有3窝是作为对照组。
这3窝每窝里面假设有4只是公的，总是12只，随机从中选取10只，假如这样的话，这10只用于试验的老鼠，是3个兄弟连，妈妈都是一个妈妈，除了基因方面有相似性以外，它们的成长环境也是有关联的，这样做样本量根本就不是10；
我个人的理解，如果是这么做的话，样本量是3。
正确的做法是：
每个组别里都有10窝老鼠，每窝随机抽取一只公的小老鼠，让它长到16个月再去做试验，这样样本量才真正等于10，结果也才是可信的。
今天又是努力的一天哦
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